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    rna試劑盒提取步驟

    發布時間:2022-05-30    點擊次數:58
       rna試劑盒提取步驟:
      常規植物樣品總 RNA小量抽提1.植物樣品的研磨。
      收集植物樣品并盡快浸泡到液氮中以防止RNA的降解。使用研缽、研磨棒和液氮將植物樣品研磨成盡量細小的粉末。RNA的產量取決于樣品類型和研磨效果。
      注:研磨后的植物粉末可直接保持于-70°c。
      快速稱取50-100mg 的研磨好的植物樣品至 1.5ml預冷的離心管中。
      注:在加入裂解液之前,不要讓樣品解凍。初次使用時,推薦先使用 50mg,待取得理想結果后,
      再酌情提高用量。
      2.立即加入500ulBuffer RL/ B -ME 混合液至樣品中。立即于最高速度渦旋30-60秒充分打散樣品,室溫靜置3-5分鐘讓樣品充分裂解。
      注:使用前分裝適量的 Buffer RL,每 1ml Buffer RL 加入20ulβ -疏基乙醇(B-ME)或2M DTT。若植物用量增加超過100mg,按比例增加 Buffer RL/2-ME的用量。
      3.室溫下,14,000 xg離心5 分鐘。
      4.把 gDNA過濾柱裝在2ml 收集管中。把第三步的上清液轉移至gDNA過濾柱中。14,000 xg 離心1分鐘。
      5.棄去 gDNA 過濾柱。加入 o.5倍體積無水乙醇(~250ul)至濾液中。用移液槍吸打 3-5次混勻。
      6.把 HiPure RNA Mini Column裝在 2ml 收集管中。轉移第5步的混合液至 RNA 柱子中。10,000 xg 離心30-6o秒。
      7.(可選)這一步可插入DNase進行膜上消化。(請另外訂購 DNase On Column Kit進化膜上 DNase 消化)。
      8.倒棄濾液,把柱子裝在收集管中。加入500ul Buffer RW1 至柱子中。10,000 xg
      離心30-60秒。9.倒棄濾液,把柱子裝回收集管中。加入600ul Buffer RW2 (己用乙醇稀釋)至柱子中。10,000 ×g離心30-60秒。
      注:在使用 Buffer RW2之前,必須按瓶子標簽指示用無水乙醇進行稀釋。
      10.倒棄濾液,把柱子重新裝回收集管中。加入60oul Buffer RW2(己用乙醇稀釋)至柱子中。10,000×g離心30-60秒。
      11.倒棄濾液,把柱子套回空的收集管。10,000× g 離心空柱⒉分鐘甩干柱子。12.將柱子轉移至新的 1.5ml離心管。加入 30-50ul DEPC 水至柱子的膜中央。靜置2分鐘。10,000 × g離心1分鐘。
      13.(可選)再加入 30-50ul DEPC水至柱子的膜中央。靜置﹖分鐘。10,000 × g 離心1分鐘。
      注: HiPure RNA Column最小的洗脫體積是 30ul,小于 3oul 會導致RNA 的洗脫效率下降。如果 RNA產量超過30ug,推薦按第13步進行第二次洗脫。
      14.棄去柱子,把 RNA保存于-80°c。

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