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    人白介素12(IL-12)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

    發布時間:2022-01-24    點擊次數:353

    人白介素12(IL-12)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
     

    本試劑盒僅供研究使用

    檢測范圍: 96T

    1 ng/L -60 ng/L

    使用目的:

    本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中白介素 12(IL-12)含量。

    實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素 12(IL-12)水平。用純化的人白介素12(IL-12)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素 12(IL-12), 再與 HRP 標記的白介素 12(IL-12)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素 12(IL-12)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中人白介素 12(IL-12)濃度。

    試劑盒組成:

    試劑盒組成48 孔配置96 孔配置保存

    說明書1 份1 份

    封板膜2 片(48)2 片(96)

    密封袋1 個1 個

    酶標包被板1×481×962-8℃保存

    標準品:540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存

    標準品稀釋液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存

    酶標試劑3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

    樣品稀釋液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

    顯色劑 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

    顯色劑 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

    終止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存

    濃縮洗滌液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存

    人白介素12(IL-12)酶聯免疫分析試劑盒

    標本要求

    1. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

    2. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

    操作步驟

    1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

    60 ng/L5 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    30 ng/L4 號標準品150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    15 ng/L3 號標準品150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    7.5 ng/L2 號標準品150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    3.75 ng/L1 號標準品150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,

    然后再加待測樣品 10µl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡

    量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

    3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

    4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。

    6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。

    7. 溫育:操作同 3。

    8. 洗滌:操作同 5。

    9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

    15 分鐘.

    10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

    11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

    操作程序總結:

     

     

    計算

    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,

    即為樣品的實際濃度。

    人試劑盒白介素12(IL-12)酶聯免疫分析試劑盒

    注意事項

    1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

    2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

    3. 各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間建議控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

    4. 請每次測定的同時做標準曲線,建議做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。

    7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

    8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

    9. 本試劑不同批號組分不得混用。

    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

    保存條件及有效期

    1. 試劑盒保存:;2-8℃。

    2. 有效期:6 個月

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