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    人成纖維細胞生長因子8(FGF-8)ELISA檢測試劑盒說明書

    發布時間:2021-03-01    點擊次數:410

    人成纖維細胞生長因子8(FGF-8)ELISA檢測試劑盒說明書

    檢測原理

    試劑盒采用雙抗體步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人成纖維細胞生長因子8(FGF-8)獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的成纖維細胞生長因子8(FGF-8)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

    樣品收集、處理及保存方法

    1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

    2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

    3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

    4.  組織勻漿:將組織加入適量shengli鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

    5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    自備物品

        酶標儀(450nm)
        高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
        37℃恒溫箱

    操作注意事項

          試劑盒保存在2-8℃,使用室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
          實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
          標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
          嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
          所有液體組分使用充分搖勻。

    試劑盒組成:

    名稱

    96孔配置

    48孔配置

    備注

    微孔酶標板

    12孔×8條

    12孔×4條

    標準品(160pg/ml

    0.6mL

    0.6mL

    按說明書進行稀釋

    標準品稀釋液

    6mL

    3mL

    樣本稀釋液

    6mL

    3mL

    檢測抗體-HRP

    10mL

    5mL

    20×洗滌緩沖液

    25mL

    15mL

    按說明書進行稀釋

    底物A

    6mL

    3mL

    底物B

    6mL

    3mL

    終止液

    6mL

    3mL

    封板膜

    2

    2

    說明書

    1

    1

    自封袋

    1

    1


    注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:160、80、40、20、10、5pg/ml

    試劑的準備

     20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

    洗板方法

          手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
          自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

    人成纖維細胞生長因子8(FGF-8)ELISA檢測試劑盒說明書

     

    操作步驟

          從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
          設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
          待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
          隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
          棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
          每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
          每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

    結果判斷

     繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

    試劑盒性能

    1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

    2.  靈敏度:低檢測濃度小于1.0 pg/ml。

    3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

    4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

    5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

    6.  有效期:6個月

    免責聲明

    1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

    2.   嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

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